細(xì)菌內(nèi)毒素定量檢測(cè)之光度測(cè)定法試驗(yàn)應(yīng)在特定的儀器中進(jìn)行，溫度一般為37℃±1℃。為保證濁度和顯色試驗(yàn)的有效性，應(yīng)預(yù)先進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線的可靠性試驗(yàn)以及供試品溶液的干擾試驗(yàn)。當(dāng)試驗(yàn)環(huán)境中發(fā)生了任何可能影響檢測(cè)結(jié)果的改變時(shí)，試驗(yàn)的有效性應(yīng)重新檢測(cè)。

　　
 

　　1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

　　

　　用標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素配成溶液并制成至少3個(gè)濃度的稀釋液(稀釋度不得大于10)，低濃度不得低于所用鱟試劑的標(biāo)示檢測(cè)限。每一稀釋步驟的混勻時(shí)間同凝膠法，每一濃度至少做3支平行管。同時(shí)要求做2支陰性對(duì)照。當(dāng)陰性對(duì)照在設(shè)定的時(shí)間內(nèi)不發(fā)生反應(yīng)，將全部數(shù)據(jù)進(jìn)行線性回歸分析。根據(jù)線性回歸分析，標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)(r)的絕對(duì)值應(yīng)該大于或等于0.980.試驗(yàn)方有效。否則須重新試驗(yàn)。

　　

　　2、細(xì)菌內(nèi)毒素定量檢測(cè)之光度測(cè)定法：

　　

　　按“光度法的干擾試驗(yàn)”中的操作步驟進(jìn)行檢測(cè)。使用溶液C生成的標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)計(jì)算溶液A的每一平行管的內(nèi)毒素濃度。選擇標(biāo)準(zhǔn)線中點(diǎn)或一個(gè)靠近中點(diǎn)的內(nèi)毒素濃度。制備溶液A、B、C和D。供試品和鱟試劑的加樣量、供試品和鱟試劑的比例以及保溫時(shí)間等，參照所用儀器和試劑的有關(guān)說(shuō)明進(jìn)行。每種溶液至少做2個(gè)平行管。

　　

　　細(xì)菌內(nèi)毒素定量檢測(cè)試驗(yàn)須符合以下三個(gè)條件方為有效：

　　

　?。?）系列溶液C的結(jié)果要符合“光度技術(shù)預(yù)試驗(yàn)”下“標(biāo)準(zhǔn)曲線的可靠性試驗(yàn)”中的要求。

　　

　?。?）用溶液B中的內(nèi)毒素濃度減去溶液A中的內(nèi)毒素濃度后，計(jì)算出的內(nèi)毒素的回收率要在50%-200%的范圍內(nèi)。

　　

　　（3）溶液D(陰性對(duì)照)在規(guī)定的反應(yīng)時(shí)間內(nèi)未檢測(cè)出內(nèi)毒素。

　　

　　若供試品溶液所在平行管的平均內(nèi)毒素濃度乘以稀釋倍數(shù)和濃度后，小于規(guī)定的內(nèi)毒素限值，判供試品符合規(guī)定。若大于規(guī)定的內(nèi)毒素限值，判供試品不符合規(guī)定。