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鱟試驗的方法——比濁法

發(fā)布時間: 2022-08-10  點擊次數(shù): 1448次

比濁法又稱濁度測定法。濁度法系利用檢測鱟試劑與內(nèi)毒素反應(yīng)過程中的濁度變化而測定內(nèi)毒素含量的方法。

 

 

Teller等首先報導(dǎo)將試劑與內(nèi)毒素作用后,可產(chǎn)生凝膠從而使液體呈混濁,其濁度與內(nèi)毒素在一定條件下(內(nèi)毒素濃度20100pg/ ml)呈線性關(guān)系。此法有如下優(yōu)點①減少了試劑的用量②快速,③操作簡便,④半自動化。

 

本試驗的方法是:將已適當稀釋后的試劑與處理后的被檢標本各0.1ml加入微孔中,振顫器振動60秒鐘,使兩者充分混勻。放置3760分鐘,然后取出在分光光度計360380nm處讀取光密度值(OD)。另以系列稀釋的標準內(nèi)毒素作陽性對照,并將其OD值與內(nèi)毒素量間的關(guān)系描成標準曲線。比較試驗管與對照管的OD值,即可知道標本中內(nèi)毒素的含量。

 

在操作中,孵育的時間是至關(guān)重要的,因為隨著時間的延長,濁度亦將增加,一般孵育1小時即可終止其反應(yīng)。即使在室溫中,如時間過長濁度亦會增加,因此孵育后應(yīng)立即讀取OD值。讀取OD值時,應(yīng)每隔1分鐘進行一次,共四次,取其平均值,變異系數(shù)應(yīng)不超過1%。

 

另外,某些注射藥品及放射性藥物本身帶有顏色或濁度時,必須減去標本本身的OD值。


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